实时荧光定量PCR（qPCR）技术：

是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

qPCR可采用SYBR Green I（或Eva Green）染料法或探针法进行相对定量、绝对定量检测。

数字PCR（dPCR）技术：

是继一代普通PCR、二代荧光定量PCR之后的第三代PCR技术。

其原理是在PCR扩增之前，将一个PCR反应体系分配到大量微小的反应单元中，在每个微反应器中包含或不包含1个或多个拷贝的目标核酸分子，进行“单分子模板”PCR扩增。扩增结束后，通过阳性反应单元（终点荧光信号判断）的数目和统计学方法计算原始样本中目标基因的拷贝数。无需依赖于对照样本和标准曲线就可以进行精确的绝对定量检测。

数字PCR可采用染料法（Eva Green）或探针法进行绝对定量检测。

1、标准品定值：

在基因检测领域，从样本的提取，到变异检测；从PCR到测序；从一代测序到三代测序；从流程评估到平台检测等等，都需要标准品。标准品的准确定值就至关重要。

（1） 验证试剂盒的提取效率、变异检测的准确度、试剂盒的灵敏度等；

（2） 验证建库效率，测序质量；

（3） 验证生信分析结果；

（4） 建立实验室LDT。

2、肿瘤相关的稀有突变检测；

肿瘤相关基因的变异复杂多变，包括替换，重复，插入，缺失，插入，基因拷贝数变异和结构变体，包括倒位和易位等等。

3、拷贝数变异分析；

4、细胞治疗病毒残留检测；

5、基因治疗核酸滴度检测；

6、环境微生物功能基因绝对定量检测；

7、低丰度动植物病原微生物检测；

8、转基因成分检测；

9、基因表达分析。

1、引物、探针的设计与合成；

2、DNA、RNA样本提取；

3、定量PCR（qPCR）或数字PCR（dPCR）检测；

4、实验设计或项目开发。

样品及尽可能详细的背景信息（如物种信息，扩增目的基因NCBI登录号，相关文献和样品来源等）。

样品类型：

细胞：细胞数>10^6；

组织：总量>100 mg；

DNA 或RNA 样品：总量>2 μg；

或其他类型样本。

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